CCK8細(xì)胞增殖毒性檢測(cè)試劑盒是一種基于WST-8而廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速、高靈敏度檢測(cè)的試劑盒。WST-8(2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)，其在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色的甲臜formazan。活細(xì)胞的數(shù)目越多，則顏色越深。對(duì)于同樣的細(xì)胞，顏色的深淺和細(xì)胞數(shù)目呈線性關(guān)系。

與傳統(tǒng)的MTT 法相比CCK-8細(xì)胞增殖毒性檢測(cè)試劑盒具有明顯的優(yōu)勢(shì)：

1.MTT 法生成的甲臜不是水溶性的，需要使用DMSO 等有機(jī)溶劑溶解；而CCK-8(CCK-8細(xì)胞增殖毒性檢測(cè)試劑盒) 產(chǎn)生的甲臜是水溶性的，省去了溶解步驟，因此減少了該操作步驟帶來(lái)的實(shí)驗(yàn)誤差。
2.由于CCK-8 產(chǎn)生的甲臜是水溶性的，無(wú)需吸掉培養(yǎng)基后，再用DMSO 等有機(jī)溶劑溶解，非常適合用于懸浮細(xì)胞的活性測(cè)定。
3.與MTT 方法相比，CCK-8 法線性范圍更寬，靈敏度更高。
4.CCK-8 法對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性，可以多次測(cè)定，選取最佳測(cè)定時(shí)間。
5.CCK-8 法無(wú)需配制，即開(kāi)即用。
6.CCK-8 法適合大規(guī)模、高通量的樣品檢測(cè)。

使用方法：

1.在96 孔板中配制100 μL 的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24 小時(shí)（在37℃，5% CO2的條件下）。
2.向培養(yǎng)板加入10 μL 的待測(cè)藥物進(jìn)行處理。
3.根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段時(shí)間 （例如：6, 12，24 或48 小時(shí)）。
注：如果不進(jìn)行藥物處理而直接測(cè)定細(xì)胞的活性，則不需要2-3 步驟，直接從第4 步操作。
4.向每孔加入10 μL CCK-8 溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì)影響O.D 值的讀數(shù)）。
5.將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育2-4 小時(shí)。
6.用酶標(biāo)儀測(cè)定在450 nm 處的吸光度。
7.如果暫時(shí)不測(cè)定OD 值，可 以向每孔中加入10 μL 1% SDS（w/v） 溶液或者 0.1 M HCl 溶液，并蓋上培養(yǎng)板蓋子，在室溫條件下避光保存。24 小時(shí)內(nèi)吸光度不會(huì)發(fā)生變化。